猪精液品控试验步骤2

供稿:猪猪侠

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        整体形态学检测评估可利用某种CASA系统来完成,例如SpermVision

     

            (2)细微形态

     

          在亮视野显微镜下观察,精子细胞呈半透明状,因此要想进行细致、彻底的形态学检测评估,就需要采用特殊的显微技术或染色技术,尤其是怀疑受胎率受到了影响的情况下。湿片镜检时,在载玻片上滴一滴稀释精液,再滴上一小滴戊二醛来限制精子细胞的活动,然后加上盖玻片。对精子细微形态进行检查时,需要使用1000倍油镜,并结合采用特别的显微光学技术,例如相差显微或微分干涉差(DIC)显微(BarthOk01989)

     

          精子细微形态学检查的另一个方法是,用稀释精液做成抹片,用伊红-苯胺黑染色,然后再用l000倍油镜在亮视野或相差显微镜上观察(7)

     

          不论采用哪种方法,在形态学分类检查中都至少要对每个样本计数100个精子细胞。检查的分类项目取决于检查者所受过的培训,以及他/她进行这种检查的能力。总的说来,精子细微形态学检查的基本分类包括正常细胞、头部缺陷、尾部缺陷,以及原生质滴。不过,分类项目也可以扩展,包括顶体缺陷、头部断裂、中段缺陷、近端小滴、远端小滴、畸形细胞、存在其它细胞,等等。

     

    8. 精液细菌学培养

     

          公猪射精收集来的精液出现菌精症的情况非常普遍,也就是精液被细菌污染

     

          尽管公猪的繁殖管道当中没有细菌,但经过射精和采集之后,精液可能会遭到严重污染,每毫升当中含有102106个微生物精液细菌污染的主要来源是公猪,但也包括其它来源,例如猪舍环境、猪舍工作人员、实验室工作人员,以及稀释精液用水的水质精液污染通常发生在采集过程中,因为此时精液与包皮液、粪便、被毛和皮肤距离很近。在精液采集、处理和稀释过程中,人手和设备的卫生与精液污染也有非常重要的关系

     

          公猪精液里出现的细菌污染主要来自肠杆菌科的细菌。根据文献报导,精液污染当中出现最多的细菌有肠球菌属(205)、嗜麦芽窄食单胞菌(154)、木糖氧化产碱菌(103)、粘质沙雷氏菌(103)、鲁氏不动杆菌(77)、大肠杆菌(64)、假单胞菌属(64)以及其它种的细菌(230)最近关于公猪精液当中的细菌进行了一项回顾性研究(1),研究的精液来自加拿大全国12家公猪站,由3家不同的实验室检测,结果发现最常见的细菌包括假单胞菌属(25)、不动杆菌属(97)、大肠杆菌(64)、链球菌属(6.4)、柠檬酸杆菌属(6.4)以及腐败希瓦氏菌(32)

     

          稀释精液一旦被高浓度的细菌污染,就会影响受孕率、妊娠率,并缩短精液单剂的有效贮存时间。菌精症会降低精子活力,破坏顶体,造成精子细胞死亡,从而降低精液品质。用污染精液授精可造成母猪官颈脱垂和子宫内膜炎。因此,一定要向公猪站的工作人员强调卫生的重要性,在精液采集与处理的过程中遵守卫生规程。同时,还要对实验室设备与设施采取严格的清洗消毒措施,同时,可在稀释精液中加入抗生素,保护精子细胞。

     

          鉴于菌精症的风险,公猪站最好对采集的稀释精液实施品质控制,对细菌污染情况进行检测。取每个稀释精液样本,用微生物接种环接种到5%血琼脂平板培养基上,在37℃条件下培养至少24 h,对微生物污染情况进行检测。

     

          理想结果是培养后没有发现任何微生物污染。

     

          假如任何一份稀释精液样本当中发现有细菌生长,那么就需要对细菌种类进行鉴定,并进行药敏/最低抑菌浓度(MlC)试验,以便确定采用何种抗生素来控制这种微生物。细菌的鉴定以及抗生素药敏/MIC试验可由专业兽医试验室来完成。

     

          同时,公猪站自己的实验室也要进行稀释精液品控。公猪站的实验室需要定期针对微生物进行排查、培养,以便对微生物分布的情况进行监控(至少每月l),这一点非常重要。需要进行采样培养的区域包括那些精液与稀释剂经常接触的区域,以及温暖、潮湿的区域,比如供水系统、转移水和稀释剂的容器、吸液管尖端、稀释剂桶、集精杯、培养皿、水浴池、保温箱、切片加热器,等等


    (审核编辑: 猪猪侠)

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