母猪妊娠诊断方法研究与应用进展

母猪妊娠诊断方法研究与应用进展

单冬丽
甘肃省畜牧兽医研究所

　　近年来随着集约化养猪业的发展，妊娠诊断方法受到关注和重视。母猪配种或输精后及早进行妊娠诊断，以便对怀孕母猪加强饲养管理，保证顺利分娩；及早检出空怀母猪，尽快进行再次配种或及时治疗，对于缩短繁殖周期，提高母猪繁殖率和经济效益具有重要意义。人们研究发现了多种猪的妊娠诊断方法，逐渐在生产实践中推广应用。

　1　公猪试情法

　　配种后18d～24d，用性欲旺盛的成年公猪试情，若母猪拒绝公猪接近，并在公猪试情后3d～4d不出现发情，可初步确定母猪妊娠。李德远等（2008）分别对配种后第26d～31d未返情母猪（30头）、断奶后第4d未发情母猪（10头）和发情母猪（20头）以抚摸腰背部、压背和公猪试情3种方法进行试情，探讨妊娠早期母猪与空怀母猪的试情反应的差异，结果表明配种后第27d～31d未返情且后来确认已孕的母猪，各种试情反应在各天间均无显著差异，而与断奶母猪和发情母猪间均有极显著差异；由此认为在母猪配种后第27d～31d可用此三项试情法进行妊娠诊断，将抚摸和压背时静立、拒绝触摸、使试情公猪短暂嗅闻后走开者判为己受孕，而表现为弓背者则大多为未受胎。此法的判断准确率达90.34%，但判断未妊娠的准确率较低，平均仅36.07%。总的说来，此法可将妊娠确诊时间从通常的配种后60d以上提前到配种后第27d，而且操作简便、易行。

　　2　直肠触诊法

　　选择身材矮小的女性操作，把手伸入大型的经产母猪直肠，掏出粪便，触摸子宫，妊娠母猪子宫内有羊水，子宫动脉搏动有力，而未妊娠母猪子宫动脉无羊水，弹性差，子宫动脉搏动很弱，容易判断是否妊娠。可以在母猪配种后25d内诊断妊娠，准确率高达95%～100%。但是只适用于大白、长白等大型品种的经产母猪，操作者手掌须小，体力消耗较大，目前多数猪场并未采用此法。

　3　阴道检查法

　　母猪配种后3周～4周，一直未返情，可用阴道开膣器打开阴道，观察阴道内膜的颜色、质地、黏液等变化。妊娠母猪的阴道苍白、干涩，子宫口紧闭，有极强的胶状物密封；未妊娠母猪的阴道内膜在临近卵泡期表现湿润，有浅红或潮红，分泌物稀薄，由此可以分辨是否妊娠。但此法对阴道炎、子宫炎和假孕母猪的诊断，往往准确性很低，所以在生产中应用不多。

　　4　超声波诊断法

　　超声波诊断是是把超声波的物理特点和动物组织结构的声学特点密切结合，以高频声波对母猪子宫进行探查，然后将其回波放大后以不同的形式转化成不同的信号显示出来的一种物理学诊断法。包括A型、D型和B型超声三种。与直肠检查相比，操作简便，容易掌握，省时省力，仪器价格不高，可以完全取代养猪场中沿用已久的直肠检查法。

　　4.1　A型超声波诊断法

　　A型超声波是利用哺乳动物妊娠后在胎盘内产生羊水，根据羊水的发育发展规律，利用超声波扫描，将胎囊中液体的反射波转变为电脉冲，再将电脉冲转换成以声音报警，提示被检母猪已孕或空怀。探测部位在母猪两侧后肋腹下部，倒数第1对乳头上方2.5cm处，涂上足量的菜籽油或石蜡油，然后把超声仪贴近涂油处，转动仪器，压迫皮肤排出空气，使之与皮肤紧密接触，对子宫进行弧形扫描，角度大约是与母猪体成45℃，并对准前肩。当听到仪器发出连续的“嘟嘟”声时即判定为阳性，表示已孕；若发出断续的“嘟、嘟”声则判定为阴性，表示未孕，最终确诊以分娩或流产为准。申子平等（2010）利用美国产Preg-tone  ii  plus兽用A型超声诊断仪对181头配种后18d～75d母猪进行妊娠诊断，阳性准确率为87.50%（126/144），阴性准确率为75.68%（28/37）；其中配种后18d～20d时，总准确率和阳性准确率分别为62.50%和66.67%，而30d时分别提高到81.58%和81.25%，75d时分别为96.15%和100%，说明用该诊断仪在母猪配种后18d～20d便可作出初诊，30d～40d应进行复检，才能保证检测的准确性，60d～75d可得出准确结果。该检测仪小巧轻便，易携带，操作简单，诊断快速，准确率高，适合生产现场应用推广。

　　4.2　B型超声波诊断法

　　B型超声波又称超声断层扫描法，可显示被探查部位的断层图象，根据扫查到含胎水的子宫、胎体图象或胎儿心博动诊断妊娠。让配种的母猪自由站立或侧卧于限位栏内，在母猪后肋部，最后1对乳头两侧，用5MHz超声断层装置探头对准盆腔入口，向子宫方向进行扫查，以显示胚囊、胚胎的断层像诊断为阳性，怀孕；以显示未孕子宫的断层像诊断为阴性，未孕；以显示充气的肠管，不能显示子宫为可疑，下次探查时复诊。陈甫等（2011）利用兽用B超诊断仪对180头配种1d～35d的母猪进行早期妊娠诊断，结果表明：应用B超可在配种后第18天时探测到圆形的孕囊，在28d后可100%探测到含有胚斑的不规则形状的孕囊，为猪场应用B超早期妊娠诊断提供了参考资料。但由于B超价格较高，在猪妊娠诊断中应用不多。

　　4.3　D型超声波诊断法

　　D型超声波诊断法又称超声多普勒探查法，是利用物体在运动时，声波的频率会发生改变的物理特性——称为多普勒效应，在母猪倒数第1对～2对乳头上方无毛软腹壁处，以液体石蜡和凡士林混合物涂擦，用超声多普勒检测仪探头对准子宫方向，前后左右呈扇形探测，当发射的超声遇到搏动的母体子宫动脉、胎儿心脏和胎动时，就可以探到胎心音、脐带血流音、胎动音和母体子宫脉管血流音，产生各种特征性多普勒信号，从而进行妊娠诊断。张寿等（2000）应用超声多普勒检测仪对配种后15d以上的140头母猪进行妊娠诊断试验，阳性准确率为96.33%（105/109），阴性准确率为74.19%（23/31）；随着妊娠期的延长，超声多普勒诊断的总准确率和阳性率逐渐提高，在20d以内的总准确率和阳性准确率分别为63.63%和42.85%，而21d～30d的准确率上升到84.39%和70.37%，51d～60d均达到100%。具有简便、快速、准确率高的优点，可在生产中推广应用。超声多普勒诊断仪是直接在皮肤上进行探测,对母猪和胎儿都没有不良影响，是一种安全的无创伤的诊断方法，特别适用于诊断妊娠。

　5　血小板计数法

　　母畜怀孕后的受精卵，特别是桑椹胚将产生一类乙酰化的甘油磷脂，即血小板活化因子（PAF）。PAF将引起不依赖于ADP释放和产生四烯酸代谢的血小板凝集，特别是胚胎性PAF能够介导妊娠母体对胚胎的识别，而引起母体妊娠的最初反应——血小板减少。方法为用吸管从母猪耳缘静脉吸取未凝血20ml，加入盛有0.38ml血小板稀释液的小试管内，轻轻摇匀，待红细胞完全破坏后，再用吸管取1滴渗入血细胞计数池内，静止10min～15min后，在显微镜下400倍计数。张寿（2000）采用血小板计数法对60头地处高原生态环境下的母猪进行了超早期妊娠诊断，结果受配母猪在配种后第7d血小板数降到最低（250±91.13）×103/mm3，与配种前血小板值相比差异极显著，妊娠与未妊娠的符合率为92.59%（50/54）和83.33%（5/6），总符合率达93.33%（56/60）。认为母猪配种后第7d是进行超早期妊娠诊断的最佳血检时间。李助南等（2006）应用血小板计数法对母猪早期妊娠进行诊断，10头未孕母猪的血小板测定值为323.9×109/L±3.9×109/L，10头妊娠母猪的血小板测定值在妊娠第7d减少到251.9×109±8.6×109/L，根据妊娠母猪配种前后血小板值之差≥72×109/L为妊娠标准，对20头受配母猪进行了早期妊娠诊断，经与超声波诊断结果比较，妊娠母猪符合率为87.5%（14/16）。采用血小板计数法进行早期妊娠诊断具有设备廉价简单，易操作，准确率高，易在生产实践中推广应用等优点。胚胎死亡影响诊断准确性，某些疾病（例如肝硬化、贫血、白血病及原发性血小板减少性紫癜等）可导致血小板数减少，故在进行早期妊娠诊断时应排除以上因素的干扰。

　　6　放射免疫测定法

　　放射免疫测定法（RIA）是一种将同位素的放射测量与免疫反应原理相结合的微量分析方法。Perry（1976）报道母猪在妊娠12d开始产生雌激素，主要是雌酮，在胎儿体内转变为结合状态的硫酸雌酮（E1S），并进入母体血液循环。蔡正华等（1988）对7头妊娠母猪从配种至妊娠36d采血，用RIA对血浆中E1S进行测定，妊娠20d以前一般低于0.5ng/ml，25d～30d达到1.7ng/ml～7.5ng/ml的峰值，36d降至0.5ng/ml以下；处于发情周期的非妊娠母猪，E1S始终低于0.4ng/ml，据此可于配种后25d～30d采血测定E1S含量进行猪的早期妊娠诊断。由于E1S含量是以胎儿存在与否决定的，因此和测定血浆中孕酮含量作早期妊娠诊断比较，不但方法较简便，而且可以提高诊断准确率。张德福等（1997）用RIA法测定了5头贵州香猪和5头版纳微型猪发情周期和妊娠早期外周血清的孕酮含量，发现发情周期和妊娠早期外周血清孕酮含量变化大致相同，但16d后有明显差异（p＜0.01），可供早期妊娠诊断参考，此时孕酮含量如在4ng/ml以下，则很可能未配上，而大于11ng/ml则可能已妊娠，处于中间水平的母猪则需要在配种后相当于发情周期20d时再测一次才能确诊。20d准确率较高，孕酮含量在1ng/ml以下则肯定未孕。RIA法与超声波多普勒仪妊娠诊断法比较，诊断期可提前5d～10d，负诊断的准确率也较高。局限性是用同位素3H标记，必须用液闪仪器测量，易受放射性物质的污染，仪器要求高，实验室要求严格，无法在生产现场进行，不能当日看到结果。

　　7　酶免疫测定法

　　酶免疫测定法（EIA）是用酶标记孕酮，根据肉眼观察酶作用于底物产生颜色反应的深浅进行定性试验，也可通过分光光度计或酶标读数器读取底物液的光密度值，然后计算P4浓度进行定量诊断。还可以测定血清中E1S含量进行妊娠诊断。EIA有多种方法，主要以酶联免疫吸附测定法（ELISA）常见。冯建刚等（2013）试验建立了粪样孕酮酶免法，检测灵敏度为0.2ng/mL，将该方法用于测定母猪粪样中孕酮含量，结果表明所建立的方法简便实用，可以用于母猪发情检查、妊娠诊断及卵巢机能监控。EIA法较实用，并且和RIA同样有效，与RIA相比，EIA没有放射性危害，所用主要仪器是离心机和分光光度计，试剂便宜，方法简单，灵敏度和特异性很高，因此可作为常规方法在任何实验室中应用。

　8　生殖激素诊断法

　　母猪体内占主导地位的激素是孕酮，它可以拮抗适量的外源性生殖激素，使之不起反应。在配种后的第1个发情周期即将来临之前，注射适量外源性生殖激素，根据妊娠母猪对某些外源性生殖激素有无特定反应来判断是否妊娠，妊娠母猪不表现发情症状，未孕母猪在外源性激素和卵巢激素共同作用于靶器官，发情的外部表现更为明显。

　　8.1　孕马血清促性腺激素法

　　母猪妊娠后有许多功能性黄体，抑制卵巢上卵泡发育。功能性黄体分泌孕酮，可抵消外源性孕马血清促性腺激素（PMSG）和雌激素的生理反应，母猪不表现发情即可判为妊娠。方法是在配种后14d～26d的不同时期，在被检母猪颈部肌肉注射700IU的PMSG制剂（PX-700制剂），处理5d内母猪不发情或发情微弱及不接受公猪交配者判定为妊娠，5d内母猪出现正常发情，并接受公猪交配者判定为未妊娠。渊锡藩等（1994）以PX-700生殖激素制剂对配种后14d～40d的不同胎次、4个品种及其杂种母猪97头次进行早期妊娠诊断，妊娠母猪和未妊母猪诊断的准确率均达到100%，未造成母猪流产，产仔数和胎儿发育正常，检出的未妊母猪在给药5d内即正常发情，配种后受胎率和产仔率均正常。林峰等（2001）应用PMSG制剂对52头配种后14d～26d的母猪进行早期妊娠诊断，在5d内妊娠与未妊娠猪的确诊率均为100%，用该制剂对母猪进行早期妊娠诊断的最佳时间是 配种后14d～17d，比超声波诊断法更早。本方法简便，检出时间短，具有妊娠诊断和诱发发情的双重效果。而且PMSG制剂价格低廉，操作简单、安全，更适于广大猪场进行现场操作。

　　8.2　促性腺激素法

　　促性腺激素（HMG）是绝经后妇女尿中提取的一种激素，主要以促卵泡素为主，作用与PMSG相同。由南京农业大学家畜繁殖研究室研制，南京动物激素厂试生产的猪用妊娠诊断试剂，配种后18d每头猪肌肉注射1ml，处理后5d内未发情者判为妊娠，5d内发情者判定为空怀。张红琳等（2001）用猪用妊娠诊断试剂对配种后18d的185头母猪进行早期妊娠诊断试验，检出妊娠和空怀的准确率分别为96.7%（150/155）和100%（34/34）；任选其中56头另用超声波诊断法进行早期妊娠诊断，检出妊娠和空怀的准确率分别为100%（30/30）和18.2%（4/22），说明激素法诊断空怀的准确性优于超声波法。在配种后第18d应用超声波诊断法诊断空怀的准确性只有18.2%，可能与诊断时期过早有关。诊断试剂法成本较低，每次诊断只需成本1.5元，使用时只需一次肌肉注射，一般人员都能操作，并可诱导部分发情，因此更适合于国内母猪生产条件下的推广应用。

　　9　免疫胶体金快速检测法

　　2009年，北京万华生物工程有限公司采用孕酮配对的单克隆抗体，利用胶体金免疫层析双抗夹心法，成功研制出了猪早孕诊断试纸。通过捕捉到母猪妊娠期孕酮周期性变化的规律，利用胶体金免疫层析法原理，检测尿液中的孕酮含量，以孕酮水平判断母猪是否妊娠。在母猪配种后配种后19d、20d、21d、22d要密切观察猪的行为表现，一旦发现猪有发情的表现应立即进行检测，试剂板出现一条红线为阴性，确定为未怀孕，要及时配种，可避免假发情情况。如果没有发情表现，则第23d为最后检测时间，在试剂板出现一条红线为阴性，表示未怀孕，可避免由于乏情延误诊断；出现两条红线为阳性，可确定猪已怀孕，应进入妊娠期管理。如果需要第2个情期复诊，可在配种后的第40d左右进行检测，孕猪复查可在任何时期进行。猪孕酮胶体金快速检测试纸用于猪早期妊娠诊断，具有准确率高、操作简便、检测迅速、常温储存、携带方便、对母体和胎儿安全无害等特点，而且只取猪尿进行检测，取样方便，结果读取简单，不需要专业人员操作。因此，特别适合小规模猪场和散养户使用，实用性强，推广应用前景良好。

　　综上所述，猪的妊娠诊断方法很多，各有利弊，有些方法由于受各种因素的限制（如仪器、药品等）还不能有效地在生产实践中推广应用，而有些方法则还处于研究阶段，有待进一步验证其可靠性和准确率。早期妊娠诊断技术正向着快速、准确和生产现场易于操作的方向发展。随着诊断方法的日益改进和提高，以及新方法的建立，必将产生出一种理想、高效的早期妊娠诊断方法，从而提高母猪繁殖力和养猪业的经济效益，推动养猪业的迅速发展。