科学养猪-实验室诊断

供稿:猪猪侠

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            一、血液学常规检验

    (一)红细胞计数

    红细胞碌碌压积容量测定,根据红细胞数目同正常值的偏差,来提示机体是否为急性胃肠炎或热性疾病导致的红细胞增多,或是由于某些病原或慢性消耗性疾病导致的贫血。

    (二)白细胞计数

    用冰醋酸将红细胞破坏后,计算每立方毫米内白细胞总数。

    1白细胞数目增加提示某些细菌、真菌、立克次氏体等感染或注射疫苗及血清后的表现。

    2.白细胞数日减少则提示某些病毒性疫病如猪瘟病毒或流感病毒等感染,白细胞数目急剧下降,提示病情严重可能会愈后不良。

    (三)白细胞分类计数

    将被检血推片后以瑞氏( Wright)染色液或姬姆萨氏( Giemsa)染色液进行染色,计算出各种白细胞所占的百分率,即为白细胞分类比值。根据中性粒细胞数目增多或减少及其核指数变化,即核左移或核右移、嗜酸性粒细胞数目增多或减少、淋巴细胞增多或减少及单核细胞的增多或减少,提示某些细菌、病毒、寄生虫感染或动物机体中毒、严重创伤等状态。

    二、细菌学诊断

    猪细菌性传染病的实验室诊断主要有显微镜检查、分离培养、生化特性试验、动物试验及血清学试验等。

    (一)显微镜检查

    1.显微镜种类普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜及电子显微镜等。

    2.显微镜检查目的可依据细菌的形态、大小、排列及有无芽孢、荚膜、鞭毛和染色特性等对病原菌做出初步定性,为下一步诊断下作提供依据。

    3.显微镜检查方法

    (l)直接法:多用于观察细菌能否运动,可采用压滴法或悬滴法制备标本,通过暗视野显微镜或相差显微镜检查,具有运动能力的细菌可由一个地方泳动到另一个地方,但应注意区分细菌受水分子运动的冲击而表现的布朗氏运动。

    (2)染色法:通过染料对细菌染色后,在明视野微镜下检查细菌的形态、排列及构造。常用的细菌染色法有碱性美蓝染色法、革兰氏染色法、瑞氏染色法、姜—尼(Ziehl-Neelesen)氏染色法、科兹洛夫斯基染色法和鞭毛染色法等。

    (二)细菌的分离培养

    细菌的分离培养是细菌学诊断中重要的一步。用于细菌学诊断的临诊标本常有多种细菌混杂,分离培养的目的在于获得致病菌的纯培养物。然后根据菌落的形态、大小、色泽、气味、透明度、黏稠度、边缘结构及有无溶血等进行鉴定,为确诊提供依据。

    细菌的分离培养和生化特性试验鉴定是常规的传统的方法,它也有诸多不足之处。随着动物学、血清学、分子生物学及分析微生物学的发展,应用非培养法检测和鉴定细菌显出美好的前景。

    三、病毒学诊断

    病毒缺乏完整的酶系统,只在活细胞内增殖;病毒的体积小,多数能通过常规的细菌滤器,只有借助电子显微镜才能观测其形态。常用病毒的培养、病毒的提纯、病毒主要成分和理化特性的测定及电子显微镜技术进行。

    四、动物试验

    在传染病的诊断过程中,动物试验也是常用方法之一。在病原体的分离、鉴定、毒力测定、生物制品制造、传染病的发病试验和发病机理的研究等方面都占有十分重要的地位。动物试验的优点是发病与死亡指标确定,接种简单,有良好的实验模型。

    五、血清学试验

    血清学试验是猪传染病诊断的一项重要手段。猪体受到病原微生物(细菌、病毒)感染,都可产生相应的特异性抗体,产生的抗体与其相应的微生物抗原可发生特异性反应。因此,利用这一原理,在临诊上可利用已知的微生物抗原(病毒或细菌抗原、基因工程表达的重组特异性抗原蛋白)来检測患病猪群或个体体内存在的特异性抗体,或比较发病猪群或个体急性发病期和恢复期的特异性抗体水平有无明显升高,从而判定猪群或个体是否受到感染而做出诊断。利用血清学试验也能监测猪群的带毒情况,以及进行疫苗免疫效果的评价。也可应用特异性诊断血清或单克隆抗体,采用相应的血清学技术,来检测病原微生物和对分离的病原体进行相应的鉴定。目前,已建立了一些可区分野毒感染和疫苗免疫接种猪群或个体的抗体检测技术。在猪传染病的诊断中,常用的血清学试验有凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、免疫酶技术和免疫荧光技术等。

    六、分子生物学诊断

    分子生物学诊断又称基因诊断,是在核酸(基因)水平直接检测病料组织中的病原微生物。目前,一些分子生物学诊断技术已成为猪传染病,特别是一些病毒性传染病诊断的有效手段。常用的分子生物学诊断技术有聚合酶链式反应( PCR)、反转录—聚合酶链式反应( RT – PCR)和核酸探针等。

    七、营养代谢病检验

    (一)血糖、蛋白测定

    血糖测定、血清蛋白测定、尿肌红蛋白测定、血清脂蛋白测定(琼脂糖凝胶电泳法)。

    (二)微量元素检验

    硒的测定、铜的测定、血清铜测定(分光光度法)、组织铜测定(火焰原子吸收分光光度法)、血酮体定量测定、氟的测定(氟离子选择电极法)、全血锰的测定(非火焰原子吸收分光光度法)、锌的测定。

    (三)维生素检验

    血清维生素A测定(微量荧光法)、维生素B测定、血浆维生素C测定和维生素E测定。

    八、毒物检验

    重金属铅、汞、氟、霉菌毒素、农药、鼠药。

    九、寄生虫的检验

    实验室诊断对确诊某些寄生虫病可以起到决定性的作用。主要诊断方法有粪便检查法(直接涂片法、漂浮法、沉淀法、幼虫检查法),尿液检查法和血液检查法。

    (审核编辑: 猪猪侠)

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